化学分析方法验证.ppt

化学分析方法验证 化学分许方法验证成功的前提 l 能够研究建立一个有水准的分析方法的能力 l 有化学分析方法验证的知识和水平 化学分许方法验证成功的前提 l 有水平，经过培训的实施人员 l 仪器性能已经得到确认（校准，验证，校准在 有效期内） l 可靠的对照品（法定机构提供的或有水平自己 建立的） l 质量可靠的实验试剂 存在问题 主要表现在： l 方法设计不科学 l 方法没有充分的研究，优化 l 验证的目的性不明确，验证不充分 l 实验过程不规范，验证通不过的处理方法错误 l 验证数据不合理 l 忽视方法在验证 什么时候分析方法需验证 符合下列情形之一的，应对检验方法进行验证： 1.建立或采用新的检验方法 2.分析对象或检验方法变更了 3.采用中国药典未收载的检验方法 4.法规规定的其他需要验证的检验方法 什么时候分析方法需验证（续） l 对不需要进行验证的的检验方法，应进行方法 确认，以保证检验数据准确可靠。 l 2005版药典中分析方法验证指导原则（附录 XIX A）只规定了项目和基本方法而没有合格 标准， ICH和 USP类似。 方法学验证 对分析方法的科学性，准确性和可行性进行验 证，充分表明分析方法符合测试项目的目的和求 。 方法验证的目的 目的是 判断 采用的分析方法是否科学，合 理，是否有效控制产品的内在质量。 需要验证的检测项目 1.鉴别 目的在与判定被分析物是目标化合物而非 其他物质。 共存，相似的化合物要分开。要考察其他 成分和辅料的干扰，空白试验一定要成阴性。 需要验证的检测项目 2.杂质检查 主要用于控制住成分以外的杂质，如有机杂 质，无机杂质。 限度检查 定量检查 需要验证的检测项目 l 限度检查 各种无机离子检查等 l 定量检查 定量测定： 干燥失重，水分，有关物质， 残留溶剂及其他特定检测项目 等。 需要验证的检测项目 3.含量测定 除主成分外，也包括检查项下的防腐剂，溶 出度等的含量测定等。 验证内容 l 准确度 l 精密度（重复性，中检精密度和重现性） l 专属性 l 检测线（ LOD） l 定量限（ LOQ） l 线性 l 范围 l 耐用性 准确度 定量方法 测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用回收 率 %表示。 l 原料药 已知纯度的对照品或供试品 已知准确度的另一种方法比较 l 制剂 配置回收试验法 加样回收试验法 已知准确度的另一方法比较 l 杂质 准确度 对于中药 a. 以经典方法的测定值作为真值，建立方法的 测定数据与之比较（该法适用于化学单体药物） b. 以加入对照品测定的回收率表示，一般有空 白回收（制剂空白）和加样回收的测定方法（中药 材，复方制剂等） 准确度 回收试验：测定值（ M），空白，已知量 A 的 对照品测定 回收率： R= 100% 加样回收试验：测定值（ M），背景值（ P） ，已知量的加入的对照品（或标准品）的值（ A） 回收率： R= 100% （ M,P为均值） M-空白 A M-P A 准确度 试验方法：规定的范围内，至少用九次测 定结果评价，如制备高，中，低三个不同浓度 样品各测三次。 准确度 试验方法（中药） 同一样品，制备相同浓度的 6份供试品（样品 取样量减半，以 1： 1比例加入对照品） 同一样品，制备三个浓度的供试品，每个浓度 分别制备三份供试液，对照品的加入方式有三 种方式。 对照品的加入方式 l 取相同量样品 9份（一般为样品取样量的一半），设计三个浓度 ，按不同比例加入对照品。中间浓度一般按 1； 1比例加入，低， 高浓度可选 0.5： 1， 1.5： 1的比例，加入对照品的量要适当，保 证供试品溶液的浓度（或量）在考察的线性范围内。 l 取 3种不同量的样品个三份，每个取样量分别按 1： 1比例加入对 照品，中间浓度已选定正常浓度，其他两个浓度可以结合范围测 定项目选择低，高浓度。 l 按表示量计算得组分，可参订化学药品测定方法，取 9份样品， 按 0.8： 1， 1： 1， 1： 1.2的比例加入对照品（样品取样量减半） 精密度 精密度是指在规定条件下，同一个均 匀样品，经多次取样测定所得结果 之间的接近程度。用偏差（ d），标 准偏差（ SD），相对标准偏差（ RSD）（变异系数 CV）表示。 偏差（ d） d=xi-x 测量值与平均值 之差 标准偏差（ SD） SD 相对标准偏差（ RSD） RSD= 精密度 l 重复性：在相同条件下，有同一个分析人员测定所得 结果的精密度 在规定的范围内，至少用 9次测定结果评价，如制备 不同浓度样 品各测三次 把被测浓度当做 100%，至少测 6次进行评价 l 中间精密度：同一实验室，不同时间有不同的分析人 员用不同设备所得结果的精密度（三人三机） l 重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果的精密 度。以 SD， RSD表示。 专属性 专属性只有其他成分（杂质，降解物，辅 料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定 出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时 对供试液准确而专属的测定能力，是指该法用 于复杂样品分析时是否受相互干扰程度的度量 。 专属性 l 通常是通过分析含有加了杂质，降解产物，有 关化学物质或安慰剂成分的样品，将所获的分 析结果与未加前述成分之样品的测试结果进行 比较，两组测试结果只差即为专属性。 专属性 l 鉴别反应 应能与可能共存的物质或结构相似化合物区别 不含被分析的样品，以及结构相似或组分 中的有关化合物均应呈负反应 专属性 含量测定和杂志测定 l 色谱法和其他方法：附带表性图谱说明专属性 l 表明各组分的位置，分离度是否符合要求 l 杂质或辅料可获得的情况下，试样中可加入杂志或辅料，考察测 试结果是否受干扰 l 对于杂质测定也可相试样中加入一定量的杂质，考察杂质间是否 得到分离 色谱峰纯度试验（二极管阵列，其他检测器，质 谱） 专属性 l 破坏性试验 高温，高湿，光照，酸破坏，碱破坏，氧化破坏 l 注意观察降解产物生成情况，分离度是否符合 要求 l 注意掌握破坏条件，应使主成分峰保留大约 90% 检测限 在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度 或含量 l 目视法（直观评价，非仪器分析） 可用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法，用已知浓度的被 测物，试验出能被可靠的检测出的最低浓度或量 l 信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），是把已知低浓 度试样测出的信号与空白样品的信号进行比较，算出能被可靠的检测出 的最低浓度或量，一般以信噪比 3： 1或 2： 1时的相应浓度或注入仪器的 量确定检测 l 标准差法 定量限 被测定物质能被定量测定的最低量，结果仍具 有一定准确度和精密度的要求。 l 目测法（直观评价，非仪器分析） 用已知浓度的被测物，试验出能被可靠的检测出符合准确度 和精密度要求的最低浓度或量 l 信噪比法 l 一般以信噪比（ S/N）为 10： 1时相应的浓度或注入仪器的量进 行确定。 检测线和定量限试验时应注意 A： 应以实验中得到的浓度分析，而不能靠推 算。 B:应以定量浓度限为依据确定对照溶液浓度（ 一般扩大 20—50 倍） 线性 l 线性是指再设计范围内，测试结果与试样中被 测物浓度直接呈正比例关系的程度。 l 线性应在分析需要的范围内进行评价 l 一般以最小二乘法处理数据求的回归曲线的斜 率来表示，必要时可对响应信号进行数字转换 。 l 数据要求：至少需要五个浓度考察线性，需提 供相关系数， Y截距，应列出回归方程数和线 性图。